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細胞凍存和細胞凍存步驟
2023-01-16 細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而細胞凍存步驟及細胞凍存液的選擇也是影響細胞凍存效率及解凍復蘇后細胞活力的主要條件。下面就以細胞凍存液為例講解細胞凍存原理及細胞凍存的步驟。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使...
慢病毒的感染效率受哪些因素影響？
2023-01-06 慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長達數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所...
細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種技術
2022-12-31 細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫...
溶酶體是細胞內(nèi)的消化器官
2022-12-21 溶酶體（Lysosomes）是動物細胞中重要的細胞器,其存在的完整性與動物生理病理均密切相關。溶酶體是真核細胞中為單層膜所包圍的細胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細胞內(nèi)的消化功能。新形成的初級溶酶體經(jīng)過與多種其他結(jié)構(gòu)反復融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對包裹在其中的分子進行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細胞內(nèi)的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，...
RNA的提取方法總結(jié)
2022-12-09 這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細胞質(zhì)和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細...
轉(zhuǎn)染試劑用于提高基因?qū)嶒灥男?/a>
2022-11-30 轉(zhuǎn)染是一種將外來顆粒和核酸轉(zhuǎn)移到細胞中的技術，它可以通過化學的方式來實現(xiàn)。轉(zhuǎn)染試劑用于提高基因?qū)嶒灥男剩瑥亩梢栽趹没蚝突蚪M令人難以置信的功能領域進行大量研究。在所有轉(zhuǎn)染實驗中，轉(zhuǎn)染方式的選擇尤為重要。陽離子聚合物與帶負電荷的核酸序列結(jié)合，帶正電荷的復合物被細胞膜吸引并通過內(nèi)吞作用整合到宿主細胞中。此類試劑包括PLGA（聚乳酸-乙醇酸共聚物），一種可安全用于轉(zhuǎn)染程序的食品級聚合物，以及PBAE（聚-β-氨基酯），一種能夠保護DNA分子的聚合物在宿主細胞內(nèi)遞送。這些從P...

微生物的培養(yǎng)方法步驟介紹
2022-11-29 微生物培養(yǎng)所培養(yǎng)的微生物通常是病菌、細菌、放線菌、真菌等，屬于生物培養(yǎng)的一種。微生物培養(yǎng)步驟：1.配置不同濃度的營養(yǎng)液稀釋液:取營養(yǎng)液1ml溶于9ml無菌水中,振蕩5min配成10%的溶液.2.將容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無菌水的試管中.以此類推制成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.3.將試管口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養(yǎng)皿中,在各培養(yǎng)皿上標...
蛋白酶K的性質(zhì)從這三個方面介紹
2022-11-27 蛋白酶K來源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber），是一種與枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶。由于它能降解角蛋白（keratin），因此被命名為蛋白酶K。它是一種高活性的廣譜蛋白酶，在變性劑尿素或十二烷基磺酸鈉（sodiumdodecylsulfonate，SDS）溶液中依然能保持較高酶活力，所以被廣泛應用于各種生物材料中的DNA或RNA的提取。蛋白酶K的性質(zhì)從這三個方面介紹：一、分子結(jié)構(gòu)蛋白酶K由一條肽鏈組成，包含277個氨基酸殘基，相對分子質(zhì)...

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